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你知道细胞破碎的哪几种方法吗

发布来源:  发布日期: 2022-10-22  访问量:34

在细胞学实验中,特别是植物细胞实验中,经常遇到的细胞裂解相关实验旨在通过非机械方法打破细胞壁的束缚,从而在细胞质或细胞核中完成DNA编辑相关操作的实验方法。细胞破碎的方法是什么?总结方法如下:

细胞破碎

一、细胞破碎的机械方法

机械细胞损伤实际上是这样的:通过固体或液体剪切强行打开细胞壁并溢出内容物。机械破碎的优点是不会引入可能干扰你想要提取的化学物质。然而,它很容易导致大分子内容物的失活。

1.研碗和研杵

研磨破壁法通常通过组织研磨机的研磨将植物组织样本放入冷冻液氮中。当组织材料损坏时,添加溶剂可以提取代谢物。

2.珠磨法

珠磨法是指通过固体剪切将玻璃珠或磁珠添加到等量的细胞悬浮液和涡旋混合器中,使细胞裂解的方法。这种细胞裂解法的机械剪切力足够温和,可以保持细胞器的完整性,细胞破碎率高,适合大规模使用 用于各种细胞破碎。缺点是大分子内容易失活,浆液分离困难。

3.超声波破碎仪

超声均质器的工作原理是在浸泡在细胞溶液中的钛探针中振动。它被称为空化过程,形成和爆炸小气泡,产生局部冲击波,并通过压力变化破坏细胞壁。这种方法非常适合植物和真菌细胞,但有一个缺点:噪音很大,所以必须在额外的房间里使用。

4.均质机破碎法

均质器在细胞上使用类似珠法的剪切力。细胞可以通过挤压到比它们稍小的管道中进行均质化,从而切断外压力)或使用搅拌机中的旋转刀片(转子-定子处理器)。

5.冷冻破碎法

冻融循环在解冻过程中形成冰晶和细胞膨胀,较终导致破裂。用于藻类和软植物材料。缺点是耗时。

6.高温(微波、高压釜)破碎法

高温(和压力)会破坏细胞壁中的键,使蛋白质变性。虽然速度很快,但如果你的应用受到热损伤的影响,你较好找到另一种方法。

细胞裂解

二、 非机械方法

非机械方 添加与分解细胞壁成分相关的酶或化学物质。它们通常与机械力相结合,以确保细胞完全受损。它们的缺点是细胞分解后难以分离。

1.酵素

天然酶可用于分离原生质体(无壁细胞)时去除细胞壁。可根据您使用的生物组织样本使用 溶菌酶如纤维素酶、几丁质酶、溶菌酶(破坏肽聚糖)、甘露糖酶、聚糖酶(等)。

2.化学品

醇、醚或氯仿等有机溶剂可通过渗透细胞壁和细胞膜破坏细胞壁。如果你想提取疏水分子(如植物色素),它们会更方便,因为它们会被收集在溶剂中。通常用于提取植物成分。EDTA细胞壁主要用于破坏革兰氏阴性细菌 它的细胞壁含有由脂多糖组成的脂多糖Mg 2 和 Ca 2 等阳离子稳定。EDTA 它会螯合阳离子,在细胞壁上留下洞,使外来基因很容易穿透细胞壁到达细胞内部。

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